Didelės apimties deltų klasteris prekyboje.
Be to, imunohistochemija GOLM1 ekspresija vėžio audiniuose padidėjo.
Vien biurų nuomos per maža – laikas susitelkti į paslaugas
Įvadas Prostatos vėžys PCa yra dažniausiai diagnozuotas vėžys ir antra pagrindinė vyrų mirties priežastis išsivysčiusiose šalyse. Šiuo metu sunku didelės apimties deltų klasteris prekyboje CRPC, o daugelis pažangių PCa atliktų klinikinių tyrimų parodė ribotą naudą - ligos progresavimą ir metastazę kaulams ar kitoms vietoms.
Ne koduojančių RNR ncRNA atradimas žmogaus genome buvo svarbus konceptualus persilaužimas po genomo sekos nustatymo eros.
Šiuo metu miRBase Todėl aberrantai išreikštų miRNR identifikavimas yra pirmasis žingsnis siekiant išsiaiškinti miRNR tarpininkausiančius onkogeninius kelius. Remiantis tuo, mes nustatėme miRNR ekspresijos parašą PCa, naudojant klinikinius mėginius, ir nustatėme, kad miR ekspresija buvo žymiai sumažinta PCa.
Klinikiniai mėginiai buvo gauti iš Teikyo universiteto Chiba medicinos centro pacientų. Visiems pacientams buvo padidėjęs specifinis prostatos antigenas ir buvo atlikta transrektinė prostatos adatos biopsija.
Pacientų charakteristikos nurodytos 1 lentelėje. Prieš audinių surinkimą visi pacientai pateikė raštišką sutikimą dėl audinių donorystės mokslinių tyrimų tikslais. Protokolą patvirtino Didelės apimties deltų klasteris prekyboje universiteto institucinė peržiūros taryba. RNR koncentracijos buvo nustatytos spektrofotometriškai, o molekulinis vientisumas buvo tikrinamas gelio elektroforezės būdu.
Pradinis PCR etapas susideda iš 10 min palaikymo 95 ° C temperatūroje, po to sekė 40 ciklų, susidedančių iš ojo denatūracijos 95 ° C temperatūroje ir 1 min.
Universitetų klasteris
Skaičiuojant tikslinių genų kiekius, buvo naudojamas delta delta Ct metodas. Visos reakcijos buvo atliekamos trimis egzemplioriais, ir kiekvienas tyrimas apėmė neigiamas kontrolines reakcijas, kuriose trūksta cDNA.
Ląstelių proliferacijos, migracijos ir invazijos tyrimai Ląstelės buvo transfekuotos 10 nM miRNR arba siRNR pagal atvirkštinę transfekciją didelės apimties deltų klasteris prekyboje padengtos 96 šulinėlių lėkštelėmis 3x ląstelių po duobutę. Po 72 val. Ląstelės buvo padengtos šešių šulinių plokštelėmis, o ląstelių vienagumbiai buvo nulupti naudojant P mikropipetės antgalį. Pradinis tarpo ilgis 0 val.
Ir liekamojo tarpo ilgis 24 val. Po sužeidimo apskaičiuoti pagal fotomikrografus.
Ląstelių invazijos tyrimas buvo atliktas naudojant modifikuotas Boyden kameras, turinčias Transwell'o iš anksto padengtus Matrigel membraninio filtro įdėklus su 8 μm poromis 24 šulinėlių audinių kultūros plokštelėse BD Biosciences, Bedford, MA, JAV2 x ląstelių šulinėlyje. Po 48 valandų ląstelės buvo surenkamos, o kiekvieno migracijos šulinėlio viršutinėje kameroje buvo pridėta 2 x ląstelių. Ląstelėms buvo leista įsiveržti 48 valandas.
Kodėl mums reikalingi „Delta“ ir „Cluster Delta“ („ClusterDelta“) rodikliai?
Švelniai pašalinus migruojančias ląsteles iš viršutinės kameros filtro paviršiaus, į apatinę kamerą įsiveržusios ląstelės buvo fiksuotos ir nudažytos Diff-Quick Sysmex Corporation, Kobe, Japonija. Ląstelių, migravusių į apatinį paviršių, skaičius buvo nustatytas mikroskopiškai, skaičiuojant keturias pastovaus dydžio sritis. Visi eksperimentai buvo atlikti trimis egzemplioriais. Western blotting Ląstelės surenkamos 72 val.
Po transfekcijos ir paruošti lizatai. Membranos buvo plaunamos ir inkubuojamos su anti-pelės imunoglobulino Kaip užsidirbti pinigų google internete krienų peroksidaze susietais antikūnais Nr. Šiame ekspresijos tyrime buvo įtraukti 47 PCa, turintys klinikinių didelės rizikos navikų, audinių mėginiai, ir nė vienas iš pacientų nebuvo gydytas didelės apimties deltų klasteris prekyboje gydymu, pvz.
Vektorių konstrukcijos protokolas buvo aprašytas anksčiau. PC3 ląstelės buvo transfekuotos 50 ng vektoriaus ir 10 nM miR arba miR naudojant Lipofectamine Invitrogen. Firefly ir renilla luciferazių aktyvumas ląstelių lizatuose buvo nustatytas naudojant dvigubo luciferazės tyrimo sistemą E; Promega. Imunohistochemija 39 prostatos navikų ir 8 normalaus prostatos audinių audinio mikroschema buvo gauta iš US Biomax, Inc.
Pacientų fonas ir klinikinės klinikinės charakteristikos apibendrintos papildomoje lentelėje S2. Audinio mikroelementas buvo imunitetuotas UltraVision aptikimo sistema Thermo Scientific pagal gamintojo protokolą. Skaidrės buvo apdorotos biotiniluotais ožkų antikūnais. Imuninis dažymas buvo didelės apimties deltų klasteris prekyboje pagal anksčiau aprašytą vertinimo metodą.
Koks galėtų būti planas B?
Statistinė analizė Ryšiai tarp dviejų grupių ir skaitmeninės vertės, gautos realiu laiku RT-PCR, buvo analizuojami naudojant porinę t- testą. MiR ekspresijos lygiai 1a pav. MiR ir miR ekspresijos lygiai. RNU48 buvo naudojamas kaip vidaus kontrolė.
Lygiai pateikiami kaip sklaida. Panašiai Matrigelio invazijos tyrimai parodė, kad transfekcija su šiais miRNAs sumažina ląstelių invaziją. Tarp genų genai buvo pakoreguoti 47 PCa mėginiuose, palyginti su 48 ne vėžiniais prostatos audiniais. Analizės parodė, kad PCa mėginiuose buvo reikšmingai reguliuojami 44 genai, lyginant su įprastais mėginiais.
Šioje analizėje buvo identifikuoti keturi signalizacijos keliai endocitozė, oocitų miozė, baltymų apdorojimas endoplazminėje retikuloje ir ubikvitinu paremta proteolizė papildomos lentelės S3A — E. Liuminescencijos intensyvumas žymiai sumažėjo, kai dalyvavo dvi miR arba miR nukreiptos vietovės atitinkamai — ir 5—12; 4c paveikslas, vidurinės ir apatinės plokštės.
Priešingai, liuminescencijos intensyvumas nebuvo sumažintas transfekcija su miR — pozicijoje arba su ištrintomis sekomis nei miRNA 4c pav. GAPDH ekspresija buvo naudojama normalizavimui. GAPDH buvo naudojamas kaip pakrovimo kontrolė.
Liuciferazės reporterio tyrimas, kuriame naudojami trys vektoriai, koduojantys minutės strategijos variantai miR t argetines vietas 5—12 ir — pozicijose, ir numatomas miR tikslinė vieta — pozicijoje tiek laukinio tipo WTtiek ištrynimui DEL. Renilos liuciferazės reikšmės buvo normalizuotos pagal kepenų luciferazės vertes. GOLM1 buvo stipriai išreikštas keliose naviko uždirbk pinigus protingai 7a ir b paveikslaituo tarpu normaliosiose audose nepastebėta arba buvo maža ekspresija 7c pav.
Pacientų fonas ir klinikinės klinikinės charakteristikos apibendrintos papildomoje lentelėje S4. GOLM1 ekspresijos ir išbandytų klinikopatologinių parametrų Gleason Score ir stadijų, duomenų neparodyta reikšmingų koreliacijų nebuvo. Didelės apimties deltų klasteris prekyboje tyrime pirmiausia išbandėme miR ir miR ekspresijos lygius adatos biopsijos pagrindiniuose audiniuose, surinktuose iš pacientų, sergančių PCa ir ne PCa.
Šie duomenys rodo, kad miR ir miR yra reguliuojami tomis pačiomis reguliavimo sistemomis, o šio miRNR klasterio tylėjimas gali būti pagrindinis žingsnis PCa onkogenezėje ir progresavime. Be to, buvo pranešta, kad miR ir miR slopina PC3 ląstelių kamieninių ląstelių savybes, todėl in vivo slopinama kaulų invazija ir PC3 ląstelių navikas. Kiti pranešė, kad laukinio tipo p53 slopina PC3 ląstelių epitelio-mezenhimo perėjimą ir kamieną, moduliuojant miR Šie tyrimai rodo, kad naviko slopinantis miRkaip naujas p53 reguliavimo tinklo narys, prisideda prie tiesioginio ryšio tarp p53 ir c-MYC žmogaus vėžio keliuose.
Keliose ataskaitose nustatyta, kad miR ir miR veikia kaip naviko slopintuvai, nukreipiantys įvairius onkogeninius genus keliose vėžio rūšyse. Manome, kad naujų vėžio takų ir tikslinių didelės apimties deltų klasteris prekyboje, reguliuojamų naviko slopinančių miRNR, nustatymas yra svarbus pirmas žingsnis siekiant suprasti žmogaus onkogenezę.
Remiantis šiuo požiūriu, atlikome genomo pločio genų ekspresijos analizės kombinuotą tyrimą ląstelėse, transfekuotose su naviko slopinančiais miRNA, in silico analize ir naujų miRNR reguliuojamų vėžio trajektorijų ir taikinių identifikavimu, kaip nurodyta anksčiau.
Šie duomenys rodo, kad GOLM1 veikė kaip onkogenas, prisidedantis prie vėžio ląstelių migracijos ir invazijos. Tačiau mechanizmai, skatinantys GOLM1 ekspresiją PCa, ir jo vaidmuo vėžio ląstelių migracijoje ir invazijoje lieka neaiškūs. GOLM1 yra du transkripto variantai, ir abu variantai koduoja tą patį baltymą. Nustatyta, kad GOLM1 ekspresija žmogaus PCa audiniuose, plaučių adenokarcinoma ir hepatoceliulinėje karcinomoje ekspresuojama.
Įdomu tai, kad GOLM1 ekspresija yra didesnė pacientų, sergančių kepenų ląstelių vėžiu, kraujyje ir coinmarketcap mainai, didelės apimties deltų klasteris prekyboje PCa, šlapime, nei sveikų asmenų, tai rodo, kad GOLM1 yra naudinga priemonė žmogaus vėžio diagnozei.
Remiantis mūsų imunohistochemijos duomenimis, tarp GOLM1 baltymų ekspresijos ir naviko laipsnio ar stadijos koreliacija nebuvo. Netgi geno ekspresijos duomenys GSE negalėjo rasti klinikinės koreliacijos. Priešingai, kitame tyrime nustatyta, kad vidutiniškai padidėjusi GOLM1 ekspresija yra prostatos intraepitelinė neoplazija, kuri yra priešvėžinė būklė. Keliose ataskaitose buvo nurodyta, kad Golgi aparatas yra pagrindinis ląstelių migracijos veikėjas ir didelės apimties deltų klasteris prekyboje kaip skirtingų signalizacijos takų, įskaitant mitogeno aktyvuoto proteino kinazės kelio, žinduolių rapamicino kelio, Rho šeimos GTPazių ir ciklino priklausomų kinazių, centras.
Be to, GOLM1 buvo pakoreguotas PCa klinikiniuose mėginiuose ir prisidėjo prie vėžio ląstelių migracijos ir invazijos, o tai rodo, kad šis baltymas veikia kaip onkogenas.
